第二章材料与方法
１试验材料
材料来自宁夏园艺产业园温室四个品种盆栽小菊的花朵与顶芽。
２花瓣诱导不定芽再生试验
2.１灭菌处理方案筛选
用洗洁精清洗花朵２ｍｉｎ，然后用流水冲洗６０ｓ，置于无菌操作台中备用。用７５％的酒精对试验仪器进行消毒灭菌，将花朵浸泡在０．１％升汞中进行灭菌，灭菌时间分别设置为６ｍｉｎ、８ｍｉｎ、ｌＯｍｉｎ、１２ｍｉｎ，灭菌后用无菌水清洗三遍，烧杯中备用。将花瓣剪成０．５＊０．５ｃｍ，在ＭＳ培养基中进行培养，每个处理接种丨０瓶，每瓶３片，进行３次重复。７ｄ后观察污染率和褐化死亡率。
2.2盆栽小菊愈伤组织诱导研究
在无菌操作台中将未发生污染的花瓣从ＭＳ培养基中取出，转接到愈伤组织诱导培养基中。愈伤组织诱导培养基以ＭＳ为基本培养基，设三个浓度梯度的ＮＡＡ、６－ＢＡ和ＴＤＺ，采用三因素三水平的正交试验设计，共９个处理，每个处理１０瓶，每瓶３片，进行３次重复。经过３０ｄ培养，根据不同品种盆栽小菊花瓣的愈伤组织生长状况，筛选出不同品种盆栽小菊花瓣适合的愈伤组织诱导培养基。
２．３盆栽小菊不定芽诱导试验
将花瓣边缘生长出的绿色愈伤组织切成０．５Ｘ〇．５ｃｍ大小的块，接入不定芽诱导培养基中，不定芽培养基以ＭＳ培养基为基本培养基，添加不同浓度６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＴＤＺ，采用三因素三水平的正交试验，设定９个处理，每个处理１０瓶，每瓶３块，进行３次重复。
