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小叶黄杨盆景的抗氧化酶活性测定

   日期:2019-05-03 14:51:34      浏览:18    
核心提示:处理结束后取样,选取小叶黄杨盆景的枝条从上到下第3对完整的功能叶片。样品用液氮迅速冷冻,置于–80℃冰箱内保存,
 小叶黄杨盆景对干旱高温胁迫的生理生化响应
 
摘 要:选取小叶黄杨(Buxussinicavar.parvifoliaM.Cheng)为研究材料,研究干旱(轻度、中度和重度)、高温(40℃)以及干旱高温协同胁迫下对小叶黄杨生理生化指标的作用。主要测定其色素含量,光响应曲线,反射荧光光谱,发射荧光光谱,叶绿素荧光,保护酶的活性和非结构性碳的变化,以期阐明干旱高温胁迫下黄杨的生理生化响应机制,并进一步探讨不同程度干旱、高温和干旱高温协同胁迫响应的差异,进而为黄杨的抗逆栽培研究提供理论依据。
 
1 材料与方法
 
1.1 植物材料
 
3年生小叶黄杨盆景的实生苗,苗高约1m。选取长势良好的苗木栽植于盛有培养土花盆中,1株·盆-1,共计40盆。用浙江省当地黄壤土作为栽培土壤,经测定pH值为6.55。

小叶黄杨盆景的抗氧化酶活性测定
 
1.2 实验处理
 
选取盆栽苗40盆,随机分为8组,其中4组用作干旱处理,4组干旱处理后再进行高温处理。
 
干旱胁迫:试验根据土壤含水量设置对照(CK,75%FC)、轻度干旱(LD,60%FC)、中度干旱(MD,40%FC)、重度干旱(SD,20%FC)4个水分梯度。每组处理5盆,每盆作为1个独立重复实验,每个梯度处理3天。
 
处理结束后取样,选取小叶黄杨盆景的枝条从上到下第3对完整的功能叶片。样品用液氮迅速冷冻,置于–80℃冰箱内保存,用于测定相关指标。高温胁迫:将对照组和每个干旱梯度胁迫后的苗木,放入人工气候箱(昼夜40°C/28°C,12h/12h,湿度40%RH,光照强度400μmol·m-2·s-1)进行高温胁迫处理2天。将对照组进行高温胁迫作为高温组,其它作为协同组。随后处理同上。
 
1.3 测定指标
 
1.3.1 色素含量的测定
 
选取成熟的黄杨叶片0.5g,剪碎后置于带盖的试管中,加5mL80%的丙酮,室温下遮光萃取48h,至叶片完全变白。将浸提液稀释10倍,于口径1cm石英比色杯中,分别测定470、645、663nm的OD值。按Lichtenthaler[1]的方法计算叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。每个处理取样3次。
 
 
1.3.2 糖含量的测定
 
可溶性糖含量:蒽酮比色法;淀粉含量的测定:将提取可溶性糖后的沉淀用高氯酸水解后,采用蒽酮硫酸法测定。
 
1.3.3 抗氧化酶活性测定
 
酶液提取方法:取0.2g样品液氮研磨细碎均匀,加入5mL磷酸缓冲溶液(50mmol·L–1,pH7.8),混匀后10000×g离心10分钟(4°C),上清液用于SOD、POD和CAT活性的测定。SOD活性测定参照Giannopolitis等[2]的方法;POD和CAT活性测定参照Kumari等[3]方法。
 
1.3.4 数据处理
 
所有数据均为六次重复的平均值±标准误差,将数据分为两组,一组为干旱胁迫,另一组为高温胁迫和干旱高温协同胁迫。采用Origin9软件进行统计分析和作图,采用One-WayANOVA对干旱胁迫和干旱高温协同胁迫分别进行检验。

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