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潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制

日期:2020-08-03 15:32:00     浏览:13    
核心提示:潮霉素(Hygromycin B,Hyg)对离体培养非洲紫罗兰叶片的生长及芽再生有强烈的抑制作用,由表 1 可见,在 30 和 40 mg · L-1 Hyg 的筛选培养条件下叶片再生芽受到严重抑制,
结果与分析 
 
1   Hyg 筛选压的确定 

潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制
 
潮霉素(Hygromycin B,Hyg)对离体培养非洲紫罗兰叶片的生长及芽再生有强烈的抑制作用,由表 1 可见,在 30 和 40 mg · L-1 Hyg 的筛选培养条件下叶片再生芽受到严重抑制,全部褐化死亡。鉴于经过一段延迟培养后已有分化迹象的叶片抗性增加,同时为降低假阳性植株的数量,本试验中以 30 mg · L-1的 Hyg 作为外植体起始筛选压。 
 
 
2   转基因植株的获得 

潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制
 
经农杆菌侵染后的非洲紫罗兰叶片共培养后,在温度为(23 ± 2)℃、12 h/12 h 黑暗的培养条件下经过 1 周延迟筛选后,转入筛选培养基,30 d 后开始有抗性芽形成。将抗性芽转入分化培养基继续筛选,待小苗长至 2 cm 时切下转入生根培养基,长出根系后移栽到花盆(图 1)。 
 
3   转基因植株的 GFP 检测

潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制
 
取转 Lj CYC1 非洲紫罗兰再生植株的根制成压片,用蔡氏荧光显微镜观察,在蓝光激发下可清楚地观察到根的细胞核发出绿色荧光,而野生型的根没有这种现象(图 2),这表明 GFP 已经在转基因植株中高效表达。 
 
4    转基因植株的 PCR 检测 
 
利用 Lj CYC1 和 GFP 基因引物对随机挑选的 8 株转化再生植株的叶片进行 PCR 扩增检测。Lj CYC1 扩增结果(图 3,A)显示,其中 7 株扩增出大约 652 bp 的条带。 

潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制
 
GFP 扩增结果(图 3,B)显示,有 6 株扩增出大约 538  bp 的条带,而野生型对照均没有扩增出任何条带,这说明 Lj CYC1 已初步整合到非洲紫罗兰基因组内。有 1 株只检测出 Lj CYC1 而没有检测出 GFP,可能是因为非洲紫罗兰基因组具有 CYC 的同源基因而导致 Lj CYC1 基因假阳性扩增的结果。  
 
5   RT-PCR 分析 Lj CYC1 在转基因植株不同器官中的表达 

潮霉素对培养非洲紫罗兰叶片的生长抑制
 
RT-PCR 检测结果(图 4)显示,外源 Lj CYC1 在转基因非洲紫罗兰根、叶、花序梗、花萼、花瓣、雄蕊、雌蕊都高效表达,各组织中的表达量大致相同;营养生长期的叶中表达量高于生殖生长时期各个组织中的。 
 
标签: 紫罗兰
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